NEST細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等)，使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。
 

　　不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。
 

　　市場上的NEST細(xì)胞培養(yǎng)可不少，如何選擇合適的呢？我們需要重點考慮孔的數(shù)量、孔的形狀、微孔板顏色以及表面處理。
 

　　1.孔的數(shù)量
 

　　大多數(shù)用戶在組織培養(yǎng)瓶上開始組織培養(yǎng)。不過，許多應(yīng)用也需要多孔板。理想的數(shù)量嘛，取決于你所需的通量水平，以及是否有機(jī)器人的協(xié)助。*手動地向96孔板中添加試劑，這并非不可行，但有電動移液器或機(jī)器人的幫助當(dāng)然更好。擴(kuò)展到384孔板，就更加需要機(jī)器人，而1536孔板更是絕對需要。當(dāng)然，高密度多孔板的挑戰(zhàn)還在于分析小型化。
 

　　2.孔的形狀
 

　　孔的底部可以選擇平的、圓的，或錐形的，這取決于細(xì)胞類型和下游應(yīng)用。特別是需要對培養(yǎng)物進(jìn)行成像或分光光度測定，通常平底(F-bottom)。對于不存在接觸抑制的細(xì)胞，弧形底(C-bottom)也不錯。圓底(U-bottom)適合懸浮培養(yǎng)，因為圓的表面讓細(xì)胞難以附著和生長。而錐形底很少用于細(xì)胞培養(yǎng)實驗，但在細(xì)胞沉淀時可能有用。
 

　　3.微孔板的顏色
 

　　多孔板的顏色也與應(yīng)用息息相關(guān)。如果用相差顯微鏡或肉眼觀察細(xì)胞，可選擇透明的多孔板。不過，對于可見光光譜以外的應(yīng)用(如冷光或熒光)，有顏色的多孔板(如白色或黑色)則是必需的。在使用從頂部讀數(shù)的儀器時，底部應(yīng)該是不透明的，而使用顯微鏡或底部讀數(shù)的儀器時，應(yīng)選擇底部透明的多孔板。冷光樣品通常選擇白色表面，以便最大限度提高信號的反射率，而大于300 nm的熒光應(yīng)用通常使用黑色表面，以吸收激發(fā)信號。有顏色的表面還可以防止相鄰孔之間的信號串?dāng)_。
 

　　4.表面處理
 

　　選擇哪種細(xì)胞表面處理，這要取決于你培養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞還是貼壁細(xì)胞。對于懸浮或球體細(xì)胞培養(yǎng)，它經(jīng)過專門的疏水凝膠處理，可抑制細(xì)胞或蛋白附著。對于輕松附著的貼壁細(xì)胞(如HeLa)，標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)表面就足夠了。對于那些貼壁有困難的細(xì)胞(如原代細(xì)胞)，或涉及到嚴(yán)格洗滌的應(yīng)用，建議使用BRAND的cellGrade微孔板。這種*的表面與多聚賴氨酸處理的表面相似，但它不是涂層，而是塑料性質(zhì)的物理變化，因此不需要冷藏。對于那些敏感細(xì)胞或血清量減少的細(xì)胞，建議使用cellGrade plus表面。
 

　　當(dāng)然不能忽視培養(yǎng)容器的質(zhì)量。這不僅僅指NEST細(xì)胞培養(yǎng)，還包括與細(xì)胞接觸的一切，比如吸頭，以避免細(xì)胞污染或死亡。